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【简答题】

某学生在用 EcoRI切割外源 DNA片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因?

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第4题

A、用65℃处理5~10分钟使限制性内切核酸酶失活  B、用CIP处理载体DNA防止自身环化  C、进行琼脂糖凝胶电泳监测  D、上述说法都正确  

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第8题

A、用BamHI切割一重组质粒DNA分子并从中分离纯化了两个DNA片段,一段长400bp,另一段长900bp。现在希望将这两个片段重新连接起来,得到如图1所示的结果。
于是将这两种片段混合起来,并在连接酶的存在下进行温育,分别在30分钟和8小时取样进行凝胶电泳分析,令人惊讶的是,连接产物并非是理想中的1.3kb的重组分子,而是一种复杂的片段模式(图A)。同时发现随着温育时间的延长,较小片段的浓度逐渐降低,大片段的浓度逐渐增加。如果用BamHI来切割连接后的混合物,则起始的片段可以重新产生(图A)。
从凝胶中分离纯化出1.3kb的片段,并取出一部分用BamHI进行切割,以检查它的结构。正如预料的一样,出现了两个原始的带(图B)。但是用EcoRI切割另一部分样品,希望能够产生两个300bp和一个长度为700bp的核苷酸片段,然而,凝胶电泳的结果,令人惊奇(图B)。

  

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