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提问人：网友 发布时间：
【简答题】

用连接酶将 Sau 3AI（，bGATC）切割的 DNA与经 BamHI（G↓’GATCC）切割的 DNA连接起来后，能够被 BamHI 切割的机率有多大（用百分比表示）？

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第1题
[简答题] 用一限制性内切核酸酶切割 Lac+Tetr的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac 基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac-Tets受体菌，筛选 Tet 转化子，问：Lacr的基因型是什么？并说明原因。

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第2题
[判断题] 用限制性内切核酸酶 HaeⅢ分别切割载体 DNA 和供体 DNA 后，可用 E．coli DNA连接酶进行连接。

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第3题
[填空题] 原核生物主要有两种类型的 DNA连接酶：E．coliDNA连接酶和 T4DNA 连接酶。基因工程中使用的主要是 T4DNA连接酶，它是从 T4 噬菌体感染的 E．coli 中分离的种单链多肽酶，分子量为——』Oa，由 T4 噬菌体基因——编码。E．coli DNA连接是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分子量为（）kDa。这两DNA 连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，TDNA连接酶用（），而 E．coli DNA连接酶则用（）作为能源。第是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端E．coliDNA连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli DNA连接酶催化平末端连接效率也只有 T4 DNA连接酶的（）。

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第4题
[填空题] 真核生物有两种 DNA 连接酶，连接酶 I 主要是参与（），而连接酶Ⅱ则参与（）。

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第5题
[判断题] 真核生物可能有两种 DNA连接酶，连接酶 I和连接酶Ⅱ都能在 DNA合成和连接中起作用。

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第6题
[判断题] 限制性内切核酸酶 BglⅡ识别的序列为 A GATCT，BamHI 识别的序列为 GGATCC，用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA，不必使酶失活，就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。

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第7题
[判断题] T4DNA连接酶和 E．coli 连接酶都能催化双链 DNA和单链 DNA的连接。

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第8题
[判断题] T4DNA连接酶和 E．coli 连接酶作用时都需要 ATP和 NAD+作为辅助因子。

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第9题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中&#

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