搜题
用户您好， 请在下方输入框内搜索其它题目：
搜题
题目内容 （请给出正确答案）
提问人：网友 发布时间：
【简答题】

在 Cohen 构建有生物功能重组体的第一步实验中，用 EcoRI 切割了 R6-5 质粒，然后转化 E．coliC600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了 pSCl02，它是由 R6-5 的三个 EcoRI 片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性？

查看正确答案
更多“在 Cohen 构建有生物功能重组体的第一步实验中，用 EcoRI 切割了 R6-5 质粒，然后转化 E．coliC600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了 pSCl02，它是由 R6-5 的三个 EcoRI 片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性？”相关的问题
第1题
[简答题] S.N Cohen 于 1973 年构建了三个重组体，pSCl02，  pSCl05，pSCl09 请说明这三个重组体是如何获得的？各说明了什么？

点击查看答案
第2题
[填空题] Cohen 等在（）年构建了第一个有功能的重组 DNA分子。

点击查看答案
第3题
[填空题] 在构建 cDNA 克隆之前，可以用（）来富集一特殊的核苷酸序列。做法是：用来自于能够产生目的蛋白的细胞 mRNA 分子同来自于另一类型细胞（不产生这种蛋白质，但亲缘关系密切）的过量 mRNA 分子杂交。

点击查看答案
第4题
[简答题] λYES（酵母—大肠杆菌穿梭载体）是构建 cDNA 文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA 被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。       为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶 XhoI（5’-C十 TCGAG）进行切割，然后在 dTTP 存在的情况下，同 DNA 聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链 cDNA 同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC，它们的 5’端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用 2μg的7载体和 0.1μg 的 cDNA，构建了一个有 4×10 个克隆的 cDNA 文库。假定载体长为 43kb，cDNA 的平均长度是 lkb，请估计在连接混合物中，载体分子同cDNA 的比例是多少？

点击查看答案
第5题
[简答题] λYES（酵母—大肠杆菌穿梭载体）是构建 cDNA 文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA 被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。       为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶 XhoI（5’-C十 TCGAG）进行切割，然后在 dTTP 存在的情况下，同 DNA 聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链 cDNA 同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC，它们的 5’端都是磷酸。然后将载体和 cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用 2μg的7载体和 0.1μg 的 cDNA，构建了一个有 4×10 个克隆的 cDNA 文库。载体和cDNA分子要经过怎样的处理才能提高产生重组 DNA分子的效率？

点击查看答案
第6题
[填空题] 构建基因组文库时连接方法主要是（）；而构建 cDNA 文库，可用（）；或（）。

点击查看答案
第7题
[单选题] P Berg 构建 SV40 二聚体时用了几种不同的酶，其中（）的作用是制造隐蔽的 5’端。

A、末端转移酶  B、λ外切核酸酶  C、外切酶Ⅲ  D、DNA连接酶  

点击查看答案
第8题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中&#

点击查看答案
第9题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中&#

点击查看答案
账号：
答题记录 我的收藏 我的题库
客服
TOP

请使用微信扫码支付

订单号：
遇到问题请联系在线客服