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【简答题】

怎样从一个 E．coli的 Hfr 菌株中分离到一个 F ’<sup>gal＋</sup>的菌株？

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第1题

[] 假定你分离到一个E．coli&#160;的&#160;Thy-突变体，并推测有可能是ThyA&#160;基因突变。请设计一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA&#160;基因，测定突变的序列。（注：E．coli&#160;野生型的&#160;ThyA&#160;基因的序列是已知的）

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第2题

[简答题] 一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母&#160;DNA&#160;连接后转化对两种抗生素都敏感的&#160;E.coli&#160;菌株。&#160;&#160;（1）利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞？&#160;&#160;（2）怎样区分接受了插入酵母&#160;DNA的质粒的克隆？

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第3题

[填空题] 原核生物主要有两种类型的&#160;DNA连接酶：E．coliDNA连接酶和&#160;T4DNA&#160;连接酶。基因工程中使用的主要是&#160;T4DNA连接酶，它是从&#160;T4&#160;噬菌体感染的&#160;E．coli&#160;中分离的种单链多肽酶，分子量为——』Oa，由&#160;T4&#160;噬菌体基因——编码。E．coli&#160;DNA连接是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分子量为（）kDa。这两DNA&#160;连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，TDNA连接酶用（），而&#160;E．coli&#160;DNA连接酶则用（）作为能源。第是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端E．coliDNA连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli&#160;DNA连接酶催化平末端连接效率也只有&#160;T4&#160;DNA连接酶的（）。

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第4题

[填空题] 为了提高重组&#160;DNA&#160;分子对&#160;E.coli&#160;的转化效率，通常可采取（）；处理和（）。

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第5题

[判断题] 用限制性内切核酸酶&#160;HaeⅢ分别切割载体&#160;DNA&#160;和供体&#160;DNA&#160;后，可用&#160;E．coli&#160;DNA连接酶进行连接。

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第6题

[判断题] T4DNA连接酶和&#160;E．coli&#160;连接酶都能催化双链&#160;DNA和单链&#160;DNA的连接。

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第7题

[判断题] T4DNA连接酶和&#160;E．coli&#160;连接酶作用时都需要&#160;ATP和&#160;NAD+作为辅助因子。

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第8题

[单选题] 从&#160;E．coli&#160;中分离的连接酶：（）。

A、需要ATP作辅助因子 B、需要NAD作辅助因子 C、可以进行平末端和黏性末端连接 D、作用时不需要模板

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第9题

[判断题] T4DNA连接酶和&#160;E．coli&#160;连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。

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