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提问人：网友 发布时间：
【填空题】

平末端连接法（blunt end ligation）的连接效率比黏性末端连接的效率低得多，所以通常在连接反应体系中适量添加促进大分子凝聚的凝聚剂，以提高平末端 DNA连接的效率。常用的凝聚剂是（）。

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第1题
[填空题] 原核生物主要有两种类型的 DNA连接酶：E．coliDNA连接酶和 T4DNA 连接酶。基因工程中使用的主要是 T4DNA连接酶，它是从 T4 噬菌体感染的 E．coli 中分离的种单链多肽酶，分子量为——』Oa，由 T4 噬菌体基因——编码。E．coli DNA连接是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分子量为（）kDa。这两DNA 连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，TDNA连接酶用（），而 E．coli DNA连接酶则用（）作为能源。第是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端E．coliDNA连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli DNA连接酶催化平末端连接效率也只有 T4 DNA连接酶的（）。

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第2题
[单选题] 从 E．coli 中分离的连接酶：（）。

A、需要ATP作辅助因子  B、需要NAD作辅助因子  C、可以进行平末端和黏性末端连接  D、作用时不需要模板  

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第3题
[判断题] pBR322可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。

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第4题
[判断题] 限制性内切核酸酶 BglⅡ识别的序列为 A GATCT，BamHI 识别的序列为 GGATCC，用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA，不必使酶失活，就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。

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第5题
[] 如何利用 T4DNA聚合酶制备 3’隐含末端或双链平末端？

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第6题
[简答题] 用一限制性内切核酸酶切割 Lac+Tetr的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac 基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac-Tets受体菌，筛选 Tet 转化子，问：Lacr的基因型是什么？并说明原因。

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第7题
[填空题] 1984 年，Hung 和 Wesink 发现如果两个不同的 5’黏性末端通过部分填补得到如下的单链突出末端，即可有效地相互连接： （1）（）；（2）（）；（3）（）。

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第8题
[填空题] Clark 发现用 Taq DNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链 DNA分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的（）。

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第9题
[单选题] T4DNA连接酶是从 T4 噬菌体感染的 E．coli 中分离的，这种连接酶（）。

A、催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源  B、既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接  C、是一种单肽酶，分子量为74kDa  D、既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接  

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