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【简答题】

用加有注释的图表说明 F质粒是怎样从一个F<sup>+</sup>细胞转移到F<sup>—</sup>细胞。并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。

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第1题

[简答题] 有人用限制性内切核酸酶&#160;EcoRl&#160;分别切割松弛型质粒&#160;ColEl&#160;和严紧型质粒&#160;pSCl01（各有一个切点），然后重组连接形成一个杂种质粒&#160;pSCl34，请推测这种质粒有什么特性和用途。

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第2题

[简答题] 一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母&#160;DNA&#160;连接后转化对两种抗生素都敏感的&#160;E.coli&#160;菌株。&#160;&#160;（1）利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞？&#160;&#160;（2）怎样区分接受了插入酵母&#160;DNA的质粒的克隆？

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第3题

[] 自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是&#160;ColEl&#160;和&#160;pSCl01&#160;这两个自然质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容？

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第4题

[简答题] λYES（酵母—大肠杆菌穿梭载体）是构建&#160;cDNA&#160;文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA&#160;被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶&#160;XhoI（5’-C十&#160;TCGAG）进行切割，然后在&#160;dTTP&#160;存在的情况下，同&#160;DNA&#160;聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链&#160;cDNA&#160;同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC&#160;和5’—GGTAAATC，它们的&#160;5’端都是磷酸。然后将载体和&#160;cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用&#160;2μg的7载体和&#160;0.1μg&#160;的&#160;cDNA，构建了一个有&#160;4×10&#160;个克隆的&#160;cDNA&#160;文库。假定载体长为&#160;43kb，cDNA&#160;的平均长度是&#160;lkb，请估计在连接混合物中，载体分子同cDNA&#160;的比例是多少？

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第5题

[简答题] λYES（酵母—大肠杆菌穿梭载体）是构建&#160;cDNA&#160;文库的高效载体，这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成，它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA&#160;被插入载体的质粒部分，然后它能在体外被包装入病毒颗粒中，包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌，λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组，并进行独立复制，这就可以从质粒中分离出来，以便进行进一步的遗传操作。&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 为了最大限度地提高克隆效率，载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶&#160;XhoI（5’-C十&#160;TCGAG）进行切割，然后在&#160;dTTP&#160;存在的情况下，同&#160;DNA&#160;聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链&#160;cDNA&#160;同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来，这两段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC&#160;和5’—GGTAAATC，它们的&#160;5’端都是磷酸。然后将载体和&#160;cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用&#160;2μg的7载体和&#160;0.1μg&#160;的&#160;cDNA，构建了一个有&#160;4×10&#160;个克隆的&#160;cDNA&#160;文库。载体和cDNA分子要经过怎样的处理才能提高产生重组&#160;DNA分子的效率？

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第6题

[填空题] 噬菌粒是由质粒和噬菌体&#160;DNA&#160;共同构成的，其中来自质粒的主要结构是（），而来自噬菌体的主要结构是（）。

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第7题

[简答题] 用一限制性内切核酸酶切割&#160;Lac+Tetr的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在&#160;lac&#160;基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用&#160;DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化&#160;Lac-Tets受体菌，筛选&#160;Tet&#160;转化子，问：Lacr的基因型是什么？并说明原因。

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第8题

[简答题] 在&#160;Cohen&#160;构建有生物功能重组体的第一步实验中，用&#160;EcoRI&#160;切割了&#160;R6-5&#160;质粒，然后转化&#160;E．coliC600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了&#160;pSCl02，它是由&#160;R6-5&#160;的三个&#160;EcoRI&#160;片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性？

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第9题

[简答题] 下面是一个基因工程质粒载体形体图，请指出这个载体各部分（&#160;虚线箭头所指）的功能？并说明这个载体的在基因克隆中的用途和工作原理？

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