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【简答题】

何为DNA克隆?其主要的实验步骤。

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第1题

A、构建重组DNA分子→选择增殖细胞克隆→转化→得到重组DNA克隆  B、构建重组DNA分子→选择增殖细胞克隆→得到重组DNA克隆→转化  C、构建重组DNA分子→转化→选择增殖细胞克隆→得到重组DNA克隆  D、细胞克隆选择增殖→构建重组DNA分子→转化→得到重组DNA克隆  

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第3题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应蛋白质。这个cDNA 两侧具有 BamHI位点,因此计划将它从 BamHI位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中方法进行:载体用 BamHI切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸;接着将处理过载体同用 BamHI切割 cDNA 片段混合,加入 DNA连接酶后进行温育,连接之后,将 DNA 同已处理过可以接受 DNA细菌感受态细胞混合。最后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基平板上。由于载体上带有抗生素抗性基因,所以,转化细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照: 对照1: 将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上; 对照2: 将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上; 对照3: 将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上; 对照4: 将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细 菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所有平板上都长出了多到无法计数菌落(表 2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有平板上都没有菌落生长(表 2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表 2)。从实验平板上挑出 12 个菌落,分离了质粒 DNA,并用 BamHI进行切割,中 9个克隆产生大小同载体一样单一一条带,另三个克隆中切出一个cDNA 片段,实验终于获得成功。 你如何看待第一次实验结果?对照 1 是什么?

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第5题
[简答题] 我们实验室研究生做了一个如下实验:将pdc基因(丙酮酸脱羧酶)克隆到pUC18载体中,以便在E.coli TOP10中表达,这个pdc基因两侧具有BamHI位点,因此计划将它从BamHI位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行:载体用BamHI切割后,立即用碱性磷酸酶处理,接着将处理过载体同用BamHI切割pdc基因混合,加入T4连接酶进行温育,连接后,将DNA同处理过可以接受外源DNAE.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基平板上。  实验中同时设置了4个对照:  对照1:将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2:将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。  对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。  对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。  在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所有平板上都长出了多到无法计数菌落(见下表1)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有平板上都没菌落生长(见下表1)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(见下表1)。从实验平板上挑出12个菌落,分离质粒DNA,并用BamHI进行切割,中9个克隆产生大小同载体pUC18一样单一一条带,另3个克隆中切出一个pdc基因,实验终于获得成功。 第三次实验如何进行转化子挑选?并说明原理?

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第8题

A、DNA分子杂交技术  B、基因文库构建技术  C、单克隆抗体  D、放射性同位素标记技术  

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第9题

A、A.选择合适限制酶,使在特定位点切开DNA分子  B、B.选择能够进行自我复制小分子DNA作为载体DNA  C、C.基因克隆就是分子杂交  D、D.制备所需要DNA片段,用DNA连接酶使和载体DNA连接成重组DNA  

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