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提问人:网友 发布时间:
【简答题】

我们实验室研究生做了一个如下的实验:将pdc基因(丙酮酸脱羧酶)克隆到pUC18载体中,以便在E.coli&#160;TOP10中表达,这个pdc基因两侧具有BamHI的位点,因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行:载体用BamHI切割后,立即用碱性磷酸酶处理,接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合,加入T4连接酶进行温育,连接后,将DNA同处理过的可以接受外源DNA的E.coli&#160;TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基的平板上。&#160;<br /> 实验中同时设置了4个对照:&#160;<br /> 对照1:将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。&#160;对照2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。&#160;<br /> 对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。&#160;<br /> 对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。&#160;<br /> 在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果,在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(见下表1)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没菌落生长(见下表1)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(见下表1)。从实验平板上挑出12个菌落,分离质粒DNA,并用BamHI进行切割,其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样的单一的一条带,另3个克隆中切出一个pdc基因,实验终于获得成功。<br /> <img src="https://nimg.ppkao.com/2018-05/wangjing/2018052716545615281.jpg?sign=ec9877433b591ed501931ad01f6425d3&t=62e4857f" /> 第三次实验如何进行转化子的挑选?并说明其原理?

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第1题

A、可以。因为同一个导师指导,且没有明显数据区别,可以合并作为一次实验结果  B、不可以。两批数据是不同环境、不同人出来,不能合并作为一次实验结果  C、如果究生B及导师同意,就可以合并  

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第4题

A、A.可以。因为数据是真实,只要双方愿意  B、B.不可以。违反学术道德规范  C、C.无所谓,只要当事人愿意就可以  

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第6题

A、吃住在验室一心一意研究  B、获得经费购买昂贵实验器材  C、取得研究成果获得表彰  D、薪酬获得较大提高  

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第7题

A、只要认真阅读大量国内外文献,不用实验或调查研究  B、要认真阅读大量国内外文献,一般还需实验或调查研究  C、如果实验或调查研究,就不用阅读国内外文献  

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第8题
[简答题] 我们验室究生一个如下实验:将pdc基因(丙酮酸脱羧酶)克隆到pUC18载体中,以便在E.coli TOP10中表达,这个pdc基因两侧具有BamHI位点,因此计划将它从BamHI位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行:载体用BamHI切割后,立即用碱性磷酸酶处理,接着将处理过载体同用BamHI切割pdc基因混合,加入T4连接酶进行温育,连接后,将DNA同处理过可以接受外源DNAE.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基平板上。 实验中同时设置4个对照: 对照1:将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2:将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用T4连接酶连接(但没有pdc基因)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所有平板上都长出多到无法计数菌落(见下表1)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有平板上都没菌落生长(见下表1)。接着又进行第三次实验,这次得到转化子(见下表1)。从实验平板上挑出12个菌落,分离质粒DNA,并用BamHI进行切割,其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样单一一条带,另3个克隆中切出一个pdc基因,实验终于获得成功。 你如何看待第一次实验结果?对照1是什么?

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