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【填空题】

在()技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的 DNA探针杂交。

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第1题

A、为了绘制长为3.0kbBamHⅠ制性片段制性图谱,分别用EcoRI、HpaⅡ、EcoRI+HpaⅡ消化这一片段的三个样品,然后通过凝胶电泳分离DNA片段,溴化乙锭染色后观察DNA带型(图15.2)。请根据这些结果,绘制一个制性图谱,要标明EcoRI和HpaⅡ识别位点间的相对位置,以及它们之间的距离(kb)。
  

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第2题
[] 四膜虫是一种双核有纤毛的原生动物。小核(微核)含有细胞染色体的主要拷贝,它参与细胞的性接合,而并不通常的基因表达起作用。大核(巨核)含有细胞基因组的“工作”拷贝,由大量基因大小的双链 DNA 片段(微染色体)组成,它们活跃地进行着转录。含有核糖体 RNA基因的微染色体拷贝数很多,可以用梯度离心进行分离。电子显微镜下检查,每一个核糖体微染色体是一种长为 21kb 的线性结构。进行凝胶电泳时,核糖体微染色体的迁移也是 21kb(图 3 的第一泳道)。但是,如果用制性内切核酸酶BglⅡ切割微染色体,产生的两个片段(13.4kb 和 3.8kb)的总和不等于 21kb(图3的第二泳道),改用其他的制性内切核酸酶切割,所产生的制性片段的总和也都小于 21kb,并且不同种酶切割产生的片段总和都不一样。如果把未切割的微染色体先进行变性和复性处理,然后再进行凝胶电泳,所得到的双链 DNA片段只有 10.5kb(图 3 第三泳道);与此相似的是,将 BglⅡ切割的微染色体进行变性和复性,电泳后,13.4kb的片段被 6.7kb 的片段所取代 (图 3 第四泳道)。请解释为什么制性片段的总长度不等于 21kb?为什么变性和复性之后电泳的结果有所改变?对于核糖体微染色体的总序列组成你有什么看法?

A、四膜虫是一种双核有纤毛的原生动物。小核(微核)含有细胞染色体的主要拷贝,它参与细胞的性接合,而并不通常的基因表达起作用。大核(巨核)含有细胞基因组的“工作”拷贝,由大量基因大小的双链DNA片段(微染色体)组成,它们活跃地进行着转录。含有核糖体RNA基因的微染色体拷贝数很多,可以用梯度离心进行分离。电子显微镜下检查,每一个核糖体微染色体是一种长为21kb的线性结构。进行凝胶电泳时,核糖体微染色体的迁移也是21kb(图3的第一泳道)。但是,如果用制性内切核酸酶BglⅡ切割微染色体,产生的两个片段(13.4kb和3.8kb)的总和不等于21kb(图3的第二泳道),改用其他的制性内切核酸酶切割,所产生的制性片段的总和也都小于21kb,并且不同种酶切割产生的片段总和都不一样。如果把未切割的微染色体先进行变性和复性处理,然后再进行凝胶电泳,所得到的双链DNA片段只有10.5kb(图3第三泳道);与此相似的是,将BglⅡ切割的微染色体进行变性和复性,电泳后,13.4kb的片段被6.7kb的片段所取代(图3第四泳道)。请解释为什么制性片段的总长度不等于21kb?为什么变性和复性之后电泳的结果有所改变?对于核糖体微染色体的总序列组成你有什么看法?
  

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第3题

A、用65℃处理5~10分钟使制性内切核酸酶失活  B、用CIP处理载体DNA防止自身环化  C、进行琼脂糖凝胶电泳监测  D、上述说法都正确  

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第6题

A、用限制酶消化 DNA  B、DNA 与载体的连接  C、凝胶电泳分离 DNA片段  D、DNA片段转移到硝酸纤维膜上  

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第7题

A、A.制性片段长度不变,但是电荷改变,制性片段电泳时位置发生改变  B、B.通过电泳可以检测到突变基因所表达的蛋白与正常基因所表达的蛋白明显不同  C、C.通过基因组测序检测到突变基因有插入或缺失的片段  D、D.引起疾病的突变基因内制性酶切位点发生改变,或者是突变基因与一个发生改变的酶切位点紧密连锁  

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第9题

A、A.用限制酶消化DNA  B、B.DNA与载体的连接  C、C.用凝胶电泳分离DNA片段  D、D.DNA片段转移至硝酸纤维素膜上  E、E.用一个标记的探针与膜杂交  

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