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提问人：网友 发布时间：
【简答题】

用 Sal I切割从噬菌体 J2 分离的DNA时，得到 8 个片段，分别是：1.3、2.8、3.6、5.3、7.4、7.6、8.1 和11.4kb。但是，用 SaI I 切割从被感染的寄主细胞中分离到的 J2 噬菌体DNA 时，只得到 7 个片段，分别是：1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9 和 11.4kb，根据这些结果，您得到哪些信息？

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第1题
[] 某一染色体 DNA经内切酶 Sal I切割后，产生了若干个具有黏性末端的 DNA片段，将这些片段分别在 T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导入受体细胞，都可以进行独立地复制。

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第2题
[填空题] Sal I和Not I都是哺乳动物中识别序列稀有的酶，在哺乳动物基因组的 5kb 片段中，找到 NotI切点的概率是（）。

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第3题
[简答题] 用连接酶将 Sau 3AI（，bGATC）切割的 DNA与经 BamHI（G↓’GATCC）切割的 DNA连接起来后，能够被 BamHI 切割的机率有多大（用百分比表示）？

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第4题
[填空题] Sal I是识别6个核苷酸的酶，其识别切割的理论值是（）个碱基就有一个切点，但在哺乳动物中，大约（）才有一个切点。

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第5题
[填空题] 如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA 产生 5，突出的黏性末端，则可以用（）；进行 3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA 产生的是 3’突出的黏性末端，可以用（）进行 3’末端标记。

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第6题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中&#

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第7题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中&#

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第8题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中&#

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第9题
[填空题] I类限制酶识别 DNA 的位点和切割的 DNA位点是不同的，切割位点的识别结合有两种模型，一种是（），另一种是（）。

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