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【简答题】

连接目的基因与载体的方法有哪些?

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第1题

A、基因分离  B、基因载体连接,组成重组DNA分子  C、基因阳筛  D、重组DNA分子输入受体细胞,筛选鉴定和无性系化,获得基因表达产品  

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第4题

A、都可以转入宿主细胞  B、都限制性核酸内切酶识别位点  C、都可以连接基因  D、都是环状双链DNA分子  E、都筛选标志  

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第5题

A、对DNA片段作选择性扩增和表达检测  B、选择基因和表达载体  C、将基因载体在体外重组  

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第6题

A、基因表达载体构建  B、基因获取  C、基因检测和表达  D、将基因导入受体细胞  

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第7题
[简答题] 我们实验室研究生做了一个如下实验:将pdc基因(丙酮酸脱羧酶)克隆到pUC18载体中,以便在E.coli TOP10中表达,这个pdc基因两侧具BamHI位点,因此计划将它从BamHI位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行:载体用BamHI切割后,立即用碱性磷酸酶处理,接着将处理过载体同用BamHI切割pdc基因混合,加入T4连接酶进行温育,连接后,将DNA同处理过可以接受外源DNAE.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基平板上。 实验中同时设置了4个对照: 对照1:将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2:将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用T4连接连接(但没pdc基因载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。 对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用T4连接连接(但没pdc基因载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所平板上都长出了多到无法计数菌落(见下表1)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所平板上都没菌落生长(见下表1)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(见下表1)。从实验平板上挑出12个菌落,分离质粒DNA,并用BamHI进行切割,其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样单一一条带,另3个克隆中切出一个pdc基因,实验终于获得成功。 你如何看待第一次实验结果?对照1是什么?

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