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【简答题】

质粒载体人工构建的目的是什么?

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第2题

A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体构建cDNA文库高效载体,这种载体λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体优点。cDNA被插入载体质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来载体感染大肠杆菌效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后在dTTP存在情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸序列:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们5’端都磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg7载体和0.1μgcDNA,构建了一个有4×10个克隆cDNA文库。  

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第3题

A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体构建cDNA文库高效载体,这种载体λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体优点。cDNA被插入载体质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来载体感染大肠杆菌效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后在dTTP存在情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸序列:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们5’端都磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg7载体和0.1μgcDNA,构建了一个有4×10个克隆cDNA文库。  

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第7题

A、仅位于质粒载体中  B、具有多种酶识别序列  C、不同酶识别序列可以有重叠  D、一般人工合成后添加到载体中  E、可以通过相适应限制酶插入目基因  

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