下列关于克隆载体质粒的叙述哪一个是错误的?()
A、质粒是细菌染色体外的遗传因子,一般为双链环状的DNA分子
B、质粒在细胞内能自主地进行复制
C、质粒上都有产生大肠杆菌素的基因
D、通过“转化”,质粒进入细胞后,能使受体菌获得新的遗传特性
A、质粒是细菌染色体外的遗传因子,一般为双链环状的DNA分子
B、质粒在细胞内能自主地进行复制
C、质粒上都有产生大肠杆菌素的基因
D、通过“转化”,质粒进入细胞后,能使受体菌获得新的遗传特性
A、A.选择合适的限制酶,使其在特定的位点切开DNA分子 B、B.选择能够进行自我复制的小分子DNA作为载体DNA C、C.基因克隆就是分子杂交 D、D.制备所需要的DNA片段,用DNA连接酶使其和载体DNA连接成重组DNA
A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体)是构建cDNA文库的高效载体,这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA被插入载体的质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步的遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后在dTTP存在的情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们的5’端都是磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的7载体和0.1μg的cDNA,构建了一个有4×10个克隆的cDNA文库。
A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体)是构建cDNA文库的高效载体,这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA被插入载体的质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步的遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后在dTTP存在的情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们的5’端都是磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的7载体和0.1μg的cDNA,构建了一个有4×10个克隆的cDNA文库。
A、它的分子量较小,易于进入细胞 B、含有抗四环素(TetR)和抗氨苄青霉素(AmpR)的基因 C、若用EcoRI切割该质粒,不破坏它的两个抗生素抗性基因 D、用BamHI限制酶切割pBR322质粒,将破坏它的抗氨苄青霉素基因