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【判断题】

所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒,所用的复制起点不同。

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第2题

A、不同宿主中具有不同复制机制  B、不同宿主细胞中使用不同复制起点  C、不同宿主细胞中使用不同复制酶  D、不同宿主细胞中具有不同复制速率  

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第4题

A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体构建cDNA文库高效载体,这载体λ噬菌体基因组与一个大肠杆菌和酵母中都能复制质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体优点。cDNA被插入载体质粒部分,然后它能体外被包装入病毒颗粒中,包装起来载体感染大肠杆菌效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后dTTP存情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一具有平末端双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸序列:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们5’端都磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接一起。采用这方法用2μg7载体和0.1μgcDNA,构建了一个有4×10个克隆cDNA文库。  

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第6题

A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体构建cDNA文库高效载体,这载体λ噬菌体基因组与一个大肠杆菌和酵母中都能复制质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体优点。cDNA被插入载体质粒部分,然后它能体外被包装入病毒颗粒中,包装起来载体感染大肠杆菌效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后dTTP存情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一具有平末端双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸序列:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们5’端都磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接一起。采用这方法用2μg7载体和0.1μgcDNA,构建了一个有4×10个克隆cDNA文库。  

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