基因工程的运载体可以采用大肠杆菌的质粒,但是并不是所有的大肠杆菌的质粒都可以用于基因工程。
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A、人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定 B、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 C、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 D、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化
A、λYES(酵母—大肠杆菌穿梭载体)是构建cDNA文库的高效载体,这种载体是λ噬菌体基因组与一个在大肠杆菌和酵母中都能复制的质粒巧妙结合而成,它兼有病毒和质粒载体的优点。cDNA被插入载体的质粒部分,然后它能在体外被包装入病毒颗粒中,包装起来的载体感染大肠杆菌的效率比质粒本身要高得多。一旦进入了大肠杆菌,λYES中的质粒序列能够被诱导重组出λ基因组,并进行独立复制,这就可以从质粒中分离出来,以便进行进一步的遗传操作。 为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶XhoI(5’-C十TCGAG)进行切割,然后在dTTP存在的情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC和5’—GGTAAATC,它们的5’端都是磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的7载体和0.1μg的cDNA,构建了一个有4×10个克隆的cDNA文库。
A、Klenow酶是一种DNA聚合酶 B、合成的双链DNA有72个碱基对 C、EcoRI和BamHI双酶切的目的是保证目的基因和运载体的定向连接 D、筛选重组质粒需要大肠杆菌质粒中含有标记基因