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【判断题】

现在最常用的 pUC 载体是 pUCl8,它的分子量小,具有多克隆位点和易于选择的分子标记,并且是松弛型复制。另外,这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链 DNA。

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第6题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应蛋白质。这个cDNA 两侧具有 BamHI位点,因此计划将它从 BamHI位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中方法进行:载体用 BamHI切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸;接着将处理过载体同用 BamHI切割 cDNA 片段混合,加入 DNA连接酶后进行温育,连接之后,将 DNA 同已处理过可以接受 DNA细菌感受态细胞混合。后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基平板上。由于载体上带有抗生素抗性基因,所以,转化细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照:  对照1:   将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上;        对照2:   将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上;   对照3:   将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上;   对照4:   将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所有平板上都长出了多到无法计数菌落(表 2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有平板上都没有菌落生长(表 2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表 2)。从实验平板上挑出 12 个菌落,分离了质粒 DNA,并用 BamHI进行切割,其中&#

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第7题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应蛋白质。这个cDNA 两侧具有 BamHI位点,因此计划将它从 BamHI位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中方法进行:载体用 BamHI切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸;接着将处理过载体同用 BamHI切割 cDNA 片段混合,加入 DNA连接酶后进行温育,连接之后,将 DNA 同已处理过可以接受 DNA细菌感受态细胞混合。后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基平板上。由于载体上带有抗生素抗性基因,所以,转化细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照:  对照1:   将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上;        对照2:   将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上;   对照3:   将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上;   对照4:   将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所有平板上都长出了多到无法计数菌落(表 2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有平板上都没有菌落生长(表 2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表 2)。从实验平板上挑出 12 个菌落,分离了质粒 DNA,并用 BamHI进行切割,其中&#

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第8题
[简答题] 打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应蛋白质。这个cDNA 两侧具有 BamHI位点,因此计划将它从 BamHI位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中方法进行:载体用 BamHI切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸;接着将处理过载体同用 BamHI切割 cDNA 片段混合,加入 DNA连接酶后进行温育,连接之后,将 DNA 同已处理过可以接受 DNA细菌感受态细胞混合。后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基平板上。由于载体上带有抗生素抗性基因,所以,转化细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照:  对照1:   将未同任何载体接触过细菌细胞涂布在培养平板上;        对照2:   将未切割载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上;   对照3:   将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细菌细胞涂布在培养平板上;   对照4:   将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)载体转化过细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备,结果,在所有平板上都长出了多到无法计数菌落(表 2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有平板上都没有菌落生长(表 2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表 2)。从实验平板上挑出 12 个菌落,分离了质粒 DNA,并用 BamHI进行切割,其中&#

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